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目前世界上最常用的蛋白浓度检测方法是:BCA 蛋白定量试剂盒(BCA Protein Assay Kit)和Bradford蛋白定量试剂盒(Bradford Protein Assay Kit)。Bradford法与传统方法相比,更简单、更稳定、兼容性更好。
Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中β-巯基乙醇的浓度可高达1M,DTT的浓度可高达5mM。但受高浓度的去垢剂的影响明显,故在用Bradford蛋白定量试剂盒进行蛋白定量时,需确保SDS低于0.01%,Triton X-100低于0.05%,Tween20,60,80低于0.015%。含高浓度去污剂的蛋白定量,建议采用BCA蛋白定量试剂盒。
Bradford蛋白定量试剂盒主要由G250、缓冲液等组成,检测速度很快,少量样品一般只需10min即可完成检测。检测浓度下限达到25ug/ml,最小检测蛋白量达到0.5ug,待测样品体积为1~20ul。在50~1000ug/ml浓度范围内有较好的线性关系。
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